主要内容：

本成果介绍一种动物用重组白细胞介素的生产方法，是在现有技术的基础上，对粗制重组白细胞介素浓缩、分离、提纯、配制及滤膜除菌。所生产的重组白细胞介素除具有生产成本低、避免潜在携带外源病毒及其他病原微生物的优点之外，同时全过程蛋白质的回收率为25%，产品不含杂蛋白，提高了产品的纯度且DNA及热原质含量合格：改变了活性成分存在的方式，增强了产品的活性，使产品的活性成分真正发挥了活性作用。

创新型和先进性：

基因重组蛋白表达载体的选择是决定重组蛋白表达量的关键因素。本项目创新性地选择pBV220温控表达载体构建重组鸡白细胞介素-2大肠杆菌表达菌株并成功诱导表达大小为21KD的鸡白细胞介素-2蛋白。相比于需IPTG诱导的表达载体，pBV220温控表达载体的选择能够大大降低工业生产成本。

本研究采用复合型蛋白质层析分离技术对诱导表达的目的蛋白进行纯化。结合工业生产实际情况，确定方法一为重组鸡白细胞介素-2大规模工业生产蛋白纯化工艺。经该方法纯化后的蛋白生物活性值可达10万IU/ml且性质稳定。

重组鸡白细胞介素-2被农业部批准为国家一类新兽药，获得农业部颁发的国家一类新兽药证书，成为我国1949年建国以来国内唯一一个获此级别注册证书的重组细胞因子类新药。新产品是国际首创国内唯一成功产业化的基于基因克隆表达和重组蛋白纯化的细胞因子新型免疫增强剂，具有提高家禽机体免疫力、增强抗病能力，抗感染、抗肿瘤、抗应激和免疫调节等多种临床功效。是我国动物用重组细胞因子领域第一个真正意义上的“创新药”，具有革命性意义，填补了国内该领域技术空白。

技术优势：

本项目的关键技术为鸡白细胞介素-2多克隆表达载体的构建及蛋白的诱导表达。目前，白细胞介素-2的表达体系主要包括原核表达体系、酵母表达体系和哺乳动物细胞表达体系。其中原核表达体系因技术成熟、成本低廉、易于产业化等优点成为首选的表达体系。其中大肠杆菌因具有操作简单和能在廉价的培养基中迅速生长的特征，成为原核表达系统首选的表达菌株。常用的大肠杆菌原核表达载体有pBV220、pBV321、pET28a和pET243等。本研究选择温控表达载体pBV220用于目的蛋白多克隆表达载体的构建，其只需调节温度即可实现目的蛋白的大量表达，大大节省了大规模工业生产成本。

目前国内外关于动物细胞因子的研究比较多，但大多处于实验室研究阶段。本项目在完成实验室研究基础上，进行了该产品的中试生产。同时，按农业部新兽药申报要求，先后申请获批临床试验、重组鸡细胞介素-2研发及申报注册工作、建立产品质量标准并获得新兽药注册证书。该产品的研发申报不仅为该类产品温控表达载体的构建提供技术支持，更为重要的是填补了国内外重组鸡白细胞介素-2产品的市场空白，从而提高我国禽类疫病的防控能力。

市场应用前景：

目前常规、经典的灭活疫苗和活苗仍是疾病防控的主流和核心，经典疫苗结合新型佐剂技术、免疫增强剂技术能产生最好的保护效果，可刺激机体产生更高的抗体，产生更持久的免疫应答。而本成果的研发和推广不仅为禽类疫病的防控提供新的防治药物，而且对禽类养殖业的健康发展起到了重要的促进作用，必将产生重大的经济效益和社会效益。其核心关键技术已达到国际领先水平，为我国重组细胞因子标准的建立制定和畜牧养殖业用药安全提供了重要技术支撑。开启我国畜牧养殖业的“重组细胞因子时代”，直接助力无抗养殖、安全食品绿色产业链的发展，共创中国畜牧业生物安全体系的新篇章。